熒光分光光度計種類

熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點，可以廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領(lǐng)域。熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計，自動記錄式熒光分光光度計，計算機控制式熒光分光光度計三個階段；熒光分光光度計還可分為單光束式熒光分光光度計和雙光束式熒光分光光度計兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計，配有壽命和相分辨測定的熒光分光光度計等。

熒光分光光度計測試注意事項

①樣品應盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中，如果是揮發(fā)性樣品應使用帶塞的熒光池。

②在熒光分析時，為了得到穩(wěn)定且可靠的數(shù)據(jù)，一般需要開機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。

③溫度變化可引起熒光強度的改變。通常降低溫度，有利于提高熒光量的子產(chǎn)率，熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異，大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大，測試溫度變化不超過±3℃，對測試結(jié)果幾乎無影響。

④當熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時，溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。

⑤分子結(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中，熒光效率顯著增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。

⑥瑞利散射和拉曼散射是溶劑的兩種散射光，應注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同，拉曼散射與激發(fā)光波長不同，而熒光物質(zhì)的熒光波長與激發(fā)光波長無關(guān)，因此可以通過選擇適當?shù)募ぐl(fā)波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時選擇合適的狹縫寬度，或者空白扣除，也可以對散射光的影響進行校正。

⑦熒光物質(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導致熒光強度降低，常見的熒光猝滅劑，如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。

⑧測試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看，以防眼睛造成損傷。

⑨儀器房應注意經(jīng)常通風，避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。

熒光概論

物體經(jīng)過較短波長的光照，把能量儲存起來，然后緩慢發(fā)出較長波長的光，發(fā)出的這種光就叫熒光。物質(zhì)在吸收入射光的過程中，光子能量傳遞給物質(zhì)分子。分子被激發(fā)，電子從較低能級躍遷到較高能級，形成電子激發(fā)態(tài)分子。電子的激發(fā)態(tài)的多重態(tài)用2s 1表示，s為自旋角動量數(shù)的代數(shù)和，數(shù)值為0或1。分子中同一軌道里所占據(jù)的兩個電子必須具有相反的自旋方向，即自旋配對。分子中全部電子都自旋配對，即s=0，該分子處于單重態(tài)，用S表示。若分子吸收能量后電子躍遷過程中不發(fā)生自旋方向的變化，這時分子處于激發(fā)的單重態(tài)；若躍遷伴隨自旋方向改變，這時分子具有兩個自旋不配對的電子，即s=1，分子處于激發(fā)的三重態(tài)，符號T表示。符號S0、S1和S2分別表示分子的基態(tài)、和第二電子激發(fā)單重態(tài)，T1和T2則分別表示和第二電子激發(fā)三重態(tài)。