測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的離不開的原料，如抗原，酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原，而則為純化抗原動物后獲得的多和使用雜交瘤技術(shù)得到的單，而抗原或的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或及其酶結(jié)合物等測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。


終止液（3M　H2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入（98%）21.7ml。（5）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml0.1M檸檬酸（19.2克/L）　 24.3ml加蒸餾水50ml。（6）　TMB（四）使用液:TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml底物緩沖液（PH5.5）　 10ml0.75%H2O2　 　32μl（7）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg底物緩沖液（PH5.5）　 1ml3%H2O2　 　2μl（8）　抗原、和酶標(biāo)記。（9）　正常人和陽性對照。


蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。酶標(biāo)記工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。