以純化溶瘤病毒為例，由于其在生產(chǎn)過(guò)程中存在宿主蛋白等雜質(zhì)，純化前 SEC測(cè)試純度為6.5%。純化采用兩種基質(zhì)相同的介質(zhì)，其表面化學(xué)功能也很一致，主要區(qū)別是前者是無(wú)孔實(shí)心的層析介質(zhì)，而后者是傳統(tǒng)的多孔層析介質(zhì)。層析純化的方法是陰離子交換吸附然后梯度洗脫（Bind-elute）模式。從層析圖譜可以看出，在洗脫及CIP過(guò)程中無(wú)孔介質(zhì)洗脫雜質(zhì)更小，峰值更低，意味著上樣過(guò)程中結(jié)合的雜質(zhì)會(huì)更少，有利于表面結(jié)合的病毒分子純化。通過(guò)對(duì)層析洗脫液SEC純度分析比較，發(fā)現(xiàn)用傳統(tǒng)的多孔層析介質(zhì)實(shí)驗(yàn)得到的病毒樣品純度為54%（圖 ），而用無(wú)孔的同類(lèi)型介質(zhì)實(shí)驗(yàn)得到的病毒純度達(dá)到接近90%（圖 ）。

為了解決傳統(tǒng)整體柱制備技術(shù)難題，納微與臺(tái)灣材料合作開(kāi)發(fā)出孔徑及孔隙率可精l確控制的新方法(Tantti整體柱)。這種方法是利用單分散聚合物微球?yàn)槟０逄畛湓谡w柱中，然后把單體及交聯(lián)劑填充到微球的空隙中，加熱聚合后，再把模板微球清洗掉留下尺寸與微球模板大小一致的多孔整體柱。整體柱的孔徑大小可以通過(guò)模板微球大小進(jìn)行精l確調(diào)節(jié)，不受反應(yīng)條件影響，因此，柱與柱重復(fù)性好，且容易放大生產(chǎn)等。以單分散微球?yàn)槟０逯苽淇讖娇梢跃?span style="color:#FFFFFF;">l確控制整體柱的孔徑大小，克服了傳統(tǒng)整體柱制備方法依靠相分離形成孔道結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定的缺陷。這種的整體柱將極大提升其病毒的分離純化性能，甚至為病毒、病毒類(lèi)（疫l苗）、腺伴隨病毒(AAV)等生物大分子的分離純化帶來(lái)革命性的影響。

抗l體的層析分離步驟基本都可以采用標(biāo)準(zhǔn)化的三步曲：步用Protein A介質(zhì)進(jìn)行抗l體捕獲和濃縮；第二步用離子交換進(jìn)行中間純化以去除多聚體，宿主蛋白等雜質(zhì)；第三步是精純?nèi)コＳ郉NA，Endotoxin,Protein A 等微量雜質(zhì)。在這三步抗l體的分離純化過(guò)程中，步的Protein A親和捕獲占據(jù)分離純化成本80%以上，也是下游分離純化的瓶頸所在。親和層析之所以成本高的主要原因：首先是Protein A 價(jià)格昂貴，其價(jià)格是普通層析介質(zhì)十幾倍；第二，Protein A使用壽命短，一般離子交換填料使用壽命多達(dá)1000次，而親和填料壽命通常在100-200次；第三，Protein A 用于抗l體的捕獲和濃縮，需要處理大體積的發(fā)酵液，而親和步驟載量往往又低于陰陽(yáng)離子交換層析，使得親和層析介質(zhì)使用量比中間純化或精純的要多得多。因此，要降低抗l體的生產(chǎn)成本，解決抗l體的生產(chǎn)瓶頸關(guān)鍵在于改進(jìn)步Protein A 親和捕獲。

之二：通透大孔徑基球微替代小孔微球    Protein A 基球孔徑大小會(huì)影響生物分子在介質(zhì)的傳質(zhì)速度和有效載量，孔徑越大，分子傳質(zhì)速度越快，在高流速下具有高載量。基于軟膠基質(zhì)的GE Protein A親和介質(zhì)孔徑較小，比表面積高，其靜態(tài)吸附載量高，但傳質(zhì)阻力大，在駐留時(shí)間短，流速快的條件下，動(dòng)態(tài)載量下降的很快。納微經(jīng)過(guò)優(yōu)化篩選，專門(mén)設(shè)計(jì)的大孔結(jié)構(gòu)基球，其孔徑達(dá)到GE Protein A 介質(zhì)的一倍左右。因此該介質(zhì)傳質(zhì)速度快，使得介質(zhì)在高流速下具有高載量。從實(shí)驗(yàn)測(cè)試數(shù)據(jù)可以看到，納微UniMab與GE MabSelectSuRe在駐留時(shí)間大于4分鐘時(shí)，載量都差不多，當(dāng)駐留時(shí)間小于2分鐘時(shí)UniMab的載量比MabSelectSuRe載量高50%以上, 而且速度越快UniMab載量?jī)?yōu)勢(shì)越明顯。生產(chǎn)效率是由動(dòng)態(tài)載量和流速共同決定，流速越快載量越高，生產(chǎn)效率越高，成本越低，但親和層析介質(zhì)的動(dòng)態(tài)載量與流速成反比，流速越快，載量越低，因此對(duì)于每個(gè)Protein A親和介質(zhì)純化效率都會(huì)隨著流速升率逐步提高，到了一個(gè)的流速后，如果繼續(xù)增加流速，純化效率反而降低。林東強(qiáng)實(shí)驗(yàn)證明對(duì)于批次親和層析，駐留時(shí)間是2分鐘時(shí)生產(chǎn)效率達(dá)到，而駐留時(shí)間在2分鐘條件，UniMab的動(dòng)態(tài)載量比MabSelectSuRe 高50%以上。對(duì)于連續(xù)層析駐留時(shí)間是1分鐘時(shí)生產(chǎn)效率，而這個(gè)保留時(shí)間，UniMab的動(dòng)態(tài)載量更是MabSelectSuRe一倍以上。另外從流穿曲線對(duì)比圖也可以看出具有大孔結(jié)構(gòu)及高度粒徑均勻性的單分散Protein A親和層析介質(zhì)與多分散軟膠PorteinA 介質(zhì)相比具有更陡的穿透曲線，說(shuō)明納微單分散層析介質(zhì)具有更暢通的孔道結(jié)構(gòu)，分子擴(kuò)散速度快，流穿少，回收率高。因此利用納微大孔結(jié)構(gòu)微球不僅可以提高分子傳質(zhì)速度，提高生產(chǎn)效率，降低成本，而且在連續(xù)層析中，具有更明顯的優(yōu)勢(shì)。