制備色譜能當(dāng)分析色譜用嗎？

目前，很多客戶的要求都傾向于買一臺(tái)液相能同時(shí)解決制備和分析的所有問題，那就相當(dāng)OK。這樣的客戶大多是科研經(jīng)費(fèi)緊張，好不容易批下來點(diǎn)錢，不想都花在后期純化和分析上，所以盡量二合一。

在我看來，分析液相和制備液相是通用的，只是精度的差別問題。比如，分析的液相一般流速在0.1～10mL/min，活塞的一個(gè)沖程大概是10μL，而普通的制備液相一般都是10～100mL的流速，因此活塞桿的尺寸也會(huì)變大，一個(gè)沖程差不多是100μL；流速的精度相對(duì)來說就差了很多。流速大了，管路也相應(yīng)的粗了不少，以降低高流速帶來的背景壓力；但這樣的儀器用于分析的話，柱后的擴(kuò)散現(xiàn)象相當(dāng)?shù)膮柡Γ词乖谏V柱上達(dá)到基線分離的兩個(gè)峰，由于柱后擴(kuò)散的作用，到達(dá)檢測器的時(shí)候，差不多又會(huì)合到一起了；另外就是檢測器的差異，主要是檢測池的大小和狹縫的大小不同帶來的靈敏度的不同。制備儀器一般靈敏度是分析的1/20，以保證大量進(jìn)樣后，不會(huì)超過量程太多而平頭，分不清到底分沒分開了。

倒是有個(gè)折中的辦法，就是買分析型的液相，然后接個(gè)半制備的色譜柱。半制備就是直徑一厘米的柱子，流速5mL以內(nèi)，因此這個(gè)分析液相能達(dá)到；進(jìn)樣量大約是分析柱的10～20倍，檢測器可能會(huì)平頭，沒關(guān)系，換個(gè)波長，找個(gè)吸收較弱的波長當(dāng)檢測波長就OK了，不是大量制備的話，我想基本可以滿足需要了。

多肽的分離制備,如何上量？如何增大分離度?

反相HPLC應(yīng)當(dāng)是很好的分離小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流動(dòng)相，看保留如何，若無保留，建議改用其他色譜方法進(jìn)行分離。

關(guān)于多肽的分離，首先要知道它的分子量大小，然后選擇不同類型的填料，如孔徑的大小。我們先在分析柱（4.6mm內(nèi)徑）上做一下實(shí)驗(yàn),找到很大的分離度,這一過程的難度是很大的,要不斷地改變流動(dòng)相和固定相,然后再線性或非線性放大到制備,放大的倍數(shù)按分析柱的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。分離后可以通過冷凍干燥得到固體。

還可以考慮離子交換來分l離。

反相色譜分離純化后，怎樣除去流動(dòng)相產(chǎn)品中的TFA和乙腈或其他雜質(zhì)？

TFA是反相色譜分離中常用的添加劑?？梢杂脙龈傻霓k法去除，國外許多文獻(xiàn)是這樣報(bào)道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。

首先，凍干的辦法應(yīng)該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實(shí)驗(yàn)前盡量先檢測一下凍干品中的殘留量，只要不超過允許范圍，這種辦法是很簡單、有效的。

其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個(gè)小一點(diǎn)兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達(dá)10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗(yàn)要求。如果用分子篩，考慮稀釋，盡量也先過一個(gè)離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產(chǎn)品是堿的話，可能會(huì)形成TFA鹽，這樣通過上述方法就無法除去。一般可以用堿水洗，然后將產(chǎn)品萃取出來?；蛘咴诶锩婕尤胍欢康柠}酸，再干燥后形成鹽酸鹽。

工業(yè)制備色譜

工業(yè)色譜又稱制備色譜。利少{J組分的差速遷移而實(shí)現(xiàn)I.業(yè)規(guī)?；旌衔锓蛛x的方法它包括一個(gè)流動(dòng)相(被分離的氣相或液相)和一個(gè)固定相。兩相在色譜柱r}，進(jìn)行接觸，在色譜柱‘l，流動(dòng)相沿固定相流動(dòng)，由」幾混合物中各組分被固定相滯流程度不同，它們隨流動(dòng)相移動(dòng)的速度就不同，因而可使各組分.4.相分離。根據(jù)流動(dòng)相的不}.可，可分為}L相色譜與液相色譜兩類。根據(jù)固定相的類型，可分為吸附色譜、分配色iH離子交換色譜、親和色潛‘排I}}L色譜五類。上業(yè)色譜可分離選擇性系數(shù)非常接近的組分，它適用于熱敏N}物質(zhì)的分離，對(duì)制備高純物質(zhì)特別有效