擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。

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PCR實驗室分為四個區(qū)域(試劑配制區(qū)-sample 處理區(qū)-nucleic酸擴增區(qū)-product分析區(qū))。進入每個工作區(qū)域嚴(yán)格按單一方向進行，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(如不同的顏色)。工人離開每個工作區(qū)時不允許脫下工作服。如果使用熒光PCR儀，擴增室和產(chǎn)物分析室可以合并。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進行并有響應(yīng)壓力要求。

PCR建設(shè)應(yīng)該設(shè)立專用走廊，目的是將實驗室與其他區(qū)域分開，防止交叉污染。鑒于本次新冠檢測，要求人員采取三級防護，基本上比平時BSL-2實驗室防護多出一道(雙層防護)。所以，樣本制備間(BSL-2)的緩沖間宜適當(dāng)擴大，用于脫卸第二層(內(nèi)層)防護服、帽子、口罩和手套等防護用品之所。

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PCR實驗室的相關(guān)設(shè)置：要完成一組PCR實驗，通常需要經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增和產(chǎn)物分析4個實驗過程。

這4個實驗過程的實驗用房應(yīng)相鄰布置，組成一個獨立的PCR實驗區(qū)。標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗區(qū)包括:試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。

PCR實驗室整體平面布局

某醫(yī)院PCR實驗室平面布局，整個區(qū)域有一個公用走廊，每個獨立實驗區(qū)設(shè)有專門的緩沖區(qū)。通過壓差控制，使整個PCR實驗過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染，并且降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。

PCR實驗室應(yīng)相對獨立，盡量避免與其他普通實驗套疊或者有通道上的交叉。之前看過一個圖，他們的PCR實驗室設(shè)置在檢驗科的里面，醫(yī)廢和標(biāo)本的運送要穿過檢驗科的整個走廊，這種情況人、物流、污物均在同一個通道，感ran風(fēng)險較高，應(yīng)盡量避免。

PCR實驗室應(yīng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。這個4個區(qū)域在物理空間上必須完全獨立，各區(qū)域無論是空間上還是在使用中，應(yīng)當(dāng)始終處于完全的分割狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可以適當(dāng)合并。每個區(qū)域間設(shè)置傳遞窗，要求一側(cè)打開時另一側(cè)無法打開。

4個區(qū)域應(yīng)設(shè)置獨立的緩沖間，應(yīng)設(shè)置可以通到四個操作區(qū)域的PCR走廊，在進入各區(qū)域前，應(yīng)設(shè)置更衣間，每個區(qū)域的衣服可用不同顏色進行區(qū)分，在清潔區(qū)應(yīng)設(shè)置洗澡間、衛(wèi)生間、值班室。還應(yīng)考慮到醫(yī)廢和標(biāo)本的運送通道。