儲存條件

試劑盒的成分在試劑盒的有效期限內(nèi)必須存放于4°C條件下保存。

試劑（試劑盒內(nèi)不提供，由實(shí)驗(yàn)者自行配置）

1.  刺激和未刺激的細(xì)胞裂解物；

2.  蛋白酶抑制l劑；

3.  4 °C 搖桿或者搖床；

4.  0.5 M EDTA (pH 8.0)；

5.  1 M MgCl2；

6.  2X reducing SDS-PAGE sample buffer；

7.  電泳和免l疫印跡相關(guān)試劑；

8.  免l疫印跡緩沖液TBST (10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0.05%

Tween-20)；

9.  免l疫印跡封閉緩沖液 (TBST containing 5% 脫脂奶粉 or 3% BSA)；

10. PVDF或硝l酸纖維素膜；

11.  二抗；

12.  ECL 檢測試劑；

檢測步驟

Ι。活性Cdc42 Pull-Down實(shí)驗(yàn)

1. 等分0.5-1 mL的細(xì)胞裂解物至微量離心管中。

2. 向管中加入1mL的1X Assay/Lysis 緩沖液。

3. 向管中加入1ul的活性Cdc42單克l隆抗l體。

4. 用渦旋振蕩儀將protein A/G凝膠柱充分混勻，然后快速的吸出20ul懸浮珠漿液加入離心管中。

5. 將管置于4°C條件下孵育1H，并輕輕的進(jìn)行搖動。

6. 5000g，離心1分鐘。

7. 棄上清，這一步要非常小心以避免珠子的損失。

8. 用0.5 mL的1X Assay/Lysis緩沖液洗滌珠子三次，離心并棄去上清。

9. 后一次洗滌后，小心的移去所有的上清。

10. 用20ul的2X SDS-PAGE樣品緩沖液重懸樣品。

11. 樣品煮沸5min。

12. 5000g，離心10s。

產(chǎn)品描述

一系列結(jié)構(gòu)多樣的配體，從光子到大肽，激l活GPCRs來激發(fā)它們的生理功能。配體結(jié)合的GPCRs，反過來，起到鳥呤核苷酸交換的作用Gβγ存在下Gα亞基上的GDP與GTP交換的催化因子，導(dǎo)致Gα亞單位與Gβγ二聚體分離形成兩個功能單元（Gα和Gβγ）。Gα和Gβγ亞單位都向各種細(xì)胞信號通路發(fā)出信號。根據(jù)順序與功能同源，G蛋白分為四個家族：Gs，Gi、Gq和G12。增加這些G蛋白的效應(yīng)器和相互作用蛋白的數(shù)量已經(jīng)被鑒定，生理上G蛋白參與的過程正在增殖。