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發(fā)布時(shí)間:2020-12-10 07:06  
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TE緩沖液 Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,TE緩沖液是弱堿性,對DNA的堿基有保護(hù)性,因此,DNA在TE中的穩(wěn)定性較好,不易被破壞完整性或產(chǎn)生開環(huán)及斷裂,TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存。
將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成,則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA),TAE是使用廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對分子質(zhì)量,且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率也較快,電泳大于13kb的片段時(shí)用TAE緩沖液將取得更好的分離效果。
蛋白制備及純化過程中緩沖液的選擇非常重要,合適緩沖液才能保證蛋白的活性和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。
當(dāng)我們純化蛋白時(shí),的就是要保持蛋白在純化過程中不能失活,或者是盡量降低純化過程對蛋白活性帶來的損失。這就意味著蛋白在整個(gè)純化過程中要始終保持可溶性和活性。
因此設(shè)計(jì)一個(gè)防止蛋解和聚合的蛋白純化緩沖體系就非常重要了,尤其會(huì)凸顯在實(shí)驗(yàn)結(jié)果上。在設(shè)計(jì)緩沖buffer時(shí)應(yīng)考慮以下幾個(gè)因素:pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩(wěn)定劑。其中每一個(gè)因素都要根據(jù)你的目的蛋白進(jìn)行優(yōu)化,并以目的蛋白的活性作為優(yōu)化的評估標(biāo)準(zhǔn)。
1mol/L HEPES:將23.8gHEPES溶于約90ml的水中,用NaOH調(diào)pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份貯存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯)于足量的異中,定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹
或貯存于-20℃。
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