廣州碩譜生物科技有限公司Card-GCB固相萃取柱選擇

SPE小柱的填料裝實(shí)后，當(dāng)通過(guò)小柱的流速較低時(shí)，液體是以層流的方式通過(guò)填料層，將填料層浸潤(rùn)充分，濕潤(rùn)的液面截層逐級(jí)向前推進(jìn)，見(jiàn)附圖；當(dāng)流速過(guò)大的時(shí)候，而柱床厚度較高時(shí)，可能會(huì)在填料內(nèi)部形成溝渠通道，液流將通過(guò)溝渠，快速通過(guò)小柱，而使得填料的浸潤(rùn)變得不充分，這樣將使得體與填料的接觸面積大大降低，嚴(yán)重影響填料對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的保留效果。

鑒于大部分化合物都具有多種功能基團(tuán)，在實(shí)際操作中，主要根據(jù)目標(biāo)物和干擾物的性質(zhì)考慮采用何種萃取機(jī)理。例如：2-萘胺為弱堿性化合物(pKa=4.16)，在一定 pH條件下可呈陽(yáng)離子化狀態(tài)，同時(shí)又具有疏水和親水基。此時(shí)可根據(jù)樣品基質(zhì)選擇有利于目標(biāo)物與干擾物分離的萃取機(jī)理。在目標(biāo)物處于極性較弱的樣品基質(zhì)中時(shí)，可利用極性相互作用，選擇正相萃取方式；而在極性樣品環(huán)境下，則可采用反相萃取方式。采用陽(yáng)離子交換機(jī)制，可將萃取過(guò)程中 pH調(diào)至低于目標(biāo)物 pKa的兩個(gè) pH單位，即 pH=2.16。

SPE小柱保留雜質(zhì)固相萃取操作一般有三步：

1）、活化--除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境（注意整個(gè)過(guò)程不要使小柱干涸）。

2）、上樣--將樣品轉(zhuǎn)移入柱，此時(shí)大部分目標(biāo)化合物會(huì)隨樣品基液流出，雜質(zhì)被保留在柱上，故此步驟要開(kāi)始收集（注意流速不要過(guò)快）。

洗脫---用小體積的溶劑將組分淋洗下來(lái)并收集，合并收集液（注意流速不要過(guò)快）.

淋洗通常需要干燥，原因是什么？

回答：淋洗液一般都要干燥，主要考慮以下因素：

1.通常因?yàn)榉聪噍腿∮糜诨衔锏念A(yù)處理，正如反相萃取在色譜中是一種常見(jiàn)的分離方法，反相萃取中的淋洗液通常是一種水相或含水的緩沖溶液，除去水分，從而便于后續(xù)的干燥、濃縮步驟。

2.有些項(xiàng)目，在淋洗步驟完成后，直接用一定量的洗脫液，如1 ml甲1醇洗脫，這個(gè)過(guò)程將洗脫和定容集進(jìn)行一步處理，前者的處理必然會(huì)對(duì)洗脫步驟的定量結(jié)果產(chǎn)

三、就是溶劑互溶問(wèn)題，當(dāng)淋洗過(guò)程中使用的溶劑的極性與洗脫溶劑的極性相差很大時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生1乳化分層，洗脫阻力大，洗脫液有被稀釋的危險(xiǎn)等，從而導(dǎo)致洗脫效果不同，從而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果的失敗。

固相萃取

固相萃取是一種基于色譜分離的樣品前處理方法，是近年來(lái)應(yīng)用zui為廣泛和成熟的樣品前處理方法。固相萃取包括(含有某些官能團(tuán)的固體吸附劑)和液相(樣品和溶劑)。因?yàn)楣滔噍腿∥絼┚哂胁煌墓δ芑鶊F(tuán)，所以可以吸附和保留特定化合物于固相萃取柱。

固相萃取按其用途可分為兩種模式。其中， spe柱是典型的固相萃取方式，其主要作用是吸附被稱為目標(biāo)物吸附的化合物；雜質(zhì)吸附式固相萃取是指 spe柱吸附樣品中的雜質(zhì)，目標(biāo)物質(zhì)流穿不保留。

預(yù)柱或保護(hù)柱用還是不用的問(wèn)題！原來(lái)分析中藥品種時(shí)，我一直都是用保護(hù)柱。但來(lái)到新公司后，發(fā)現(xiàn)大家都沒(méi)有使用，幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室連保護(hù)柱都沒(méi)找到一個(gè)，也就是說(shuō)大家從來(lái)都沒(méi)有用過(guò)。后來(lái)問(wèn)一個(gè)老員工，說(shuō)是有可能影響藥品分析。我就想問(wèn)：安裝保護(hù)柱后會(huì)影響樣品分析嗎？我們做的大多是頭1孢類(lèi)的抗1生素。

答：應(yīng)該這樣說(shuō)，加上保護(hù)柱，肯定有利于保護(hù)色譜柱不受一些顆粒物質(zhì)的堵塞，肯定有害于分離度和柱效，因?yàn)楸Ｗo(hù)柱中間有著死體積的存在但是如果保護(hù)柱接得好，并且盡量控制其匹配性和經(jīng)常更換，分離度和柱效應(yīng)該影響并不大。