低溫生物菌種的注意事項

無論采用何種保藏方法，首先應(yīng)該挑選典型菌種的優(yōu)良純種來進行保藏，保藏它們的休眠體，如分生孢子、芽孢等。其次，應(yīng)根據(jù)微生物生理、生化特點，人為地創(chuàng)造環(huán)境條件，使微生物長期處于代謝不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態(tài)。這些人工造成的環(huán)境主要是干燥、低溫和缺氧，另外，避光、缺乏營養(yǎng)、添加保護劑或酸度中和劑也能有效提高保藏效果。

                                                            低溫生物菌種烘干方法

微生物菌種低溫烘干裝置是用于對微生物菌種進行烘干使用的裝置，通過產(chǎn)生較低的熱量，對微生物菌種進行長時間的烘干，在不破壞微生物菌種的同時去除微生物菌種中的水分，廣泛的使用在微生物菌種的培育實驗場合，而微生物菌種低溫烘干裝置已經(jīng)無法滿足人們的使用，需要更方便使用的微生物菌種低溫烘干裝置；在微生物菌種低溫烘干裝置使用時，無法對放置的微生物菌種進行旋轉(zhuǎn)，導(dǎo)致了微生物菌種受熱面積不夠均衡，從而烘干的不夠徹底，同時，不能夠?qū)Ψ胖玫奈恢煤透叨冗M行調(diào)整，從而不方便不同體積的微生物菌種器皿擺放進行烘干。

低溫生物菌種退化的原因是什么？

退化（degeneration）：菌種在培養(yǎng)或保藏過程中，由于自發(fā)突變的存在，出現(xiàn)某 些原有優(yōu)良生產(chǎn)性狀的劣化、遺傳標記的丟失等現(xiàn)象，稱為菌種的退化。菌種退化不是突然發(fā)生的，而是從量變到質(zhì)變的逐步演變過程。開始時，在群體細胞中僅有個別細胞發(fā)生自發(fā)突變（一般均為負變），不會使群體菌株性能發(fā)生改變。經(jīng)過連續(xù)傳代，群體中的負變個體達到一定數(shù)量，發(fā)展成為優(yōu)勢群體，從而使整個群體表現(xiàn)為嚴重的退。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致這一現(xiàn)象的原因有以下幾方面?！　?

1. 基因突變：1.有關(guān)基因發(fā)生負突變導(dǎo)致菌種退化　　菌種退化的主要原因是有關(guān)基因的負突變。如果控制產(chǎn)量的基因發(fā)生負突變，則表現(xiàn)為產(chǎn)量下降；如果控制孢子生成的基因發(fā)生負突變，則產(chǎn)生孢子的能力下降。菌種在移種傳代過程中會發(fā)生自發(fā)突變。雖然自發(fā)突變的幾率很低(一般為10-6～10-9)，尤其是對于某一特定基因來說，突變頻率更低。但是由于微生物具有極高的代謝繁殖能力，隨著傳代次數(shù)增加，退細胞的數(shù)目就會不斷增加，在數(shù)量上逐漸占優(yōu)勢，成為一株退化了的菌株。

2.表型延遲造成菌種退化　　表型延遲現(xiàn)象也會造成菌種退化。如，在誘變育種過程中，經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)某菌株初篩時產(chǎn)量較高，進行復(fù)篩時產(chǎn)量卻下降了。

分離篩選低溫生物菌種的基本程序

流程

4.1 優(yōu)良糖化酶菌株的分離與篩選

融化培養(yǎng)基→倒平板→打散孢子團粒→梯度稀釋→涂布平板→培養(yǎng)觀察→滴加碘液→挑菌落→接種→培養(yǎng)→糖化酶活力測定→菌種保存

4.2 酸乳制品中的乳酸菌的分離

制培養(yǎng)基→倒平板→梯度稀釋→涂布平板→培養(yǎng)觀察→挑菌落→接牛乳管→培養(yǎng)觀察→傳代培養(yǎng)→挑選凝乳管→乳酸測定→菌種保存

5 步驟

優(yōu)良糖化酶菌株的分離與篩選

（1）融化淀粉察氏培養(yǎng)基，稍冷后倒平板與斜面數(shù)個。

（2）取種曲少許，加入10mL帶玻璃球的無菌生理鹽水的三角瓶中，用力振蕩打散孢子團粒，使之形成均勻的孢子懸浮粒。然后將其用無菌紗布過濾于無菌試管中。

（3）將上述濾液以10倍稀釋法知釋至10-7，取后3個稀釋度的稀釋液各0.2mL，于淀粉察氏培養(yǎng)基平板上用無菌涂布器分別依次涂布2至3個皿，30℃培養(yǎng)1~2d。

（5）性能測定：測定各菌落的糖化酶活力。