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原位雜交技術(shù)電話,思特進(jìn)

發(fā)布時(shí)間:2021-01-17 09:55  

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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。用Parafilm膜封好主平板,倒置貯放于4℃,直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果裂解細(xì)菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。





用泡過預(yù)洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細(xì)菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號(hào)的強(qiáng)度和清晰度。此外,原位雜交技術(shù)做為染色體高分辨顯帶技術(shù)的補(bǔ)充和發(fā)展,在水生物的細(xì)胞遺傳學(xué)的研究領(lǐng)域?qū)l(fā)揮更重要的作用。 將濾膜轉(zhuǎn)到盛有150ml預(yù)雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時(shí)用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時(shí)用42℃)下,預(yù)雜交1-2小時(shí)。


武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。省去標(biāo)記探針在做原位雜交時(shí),以PBS或預(yù)雜交液替代雜交液,結(jié)果應(yīng)為陰性,這是一種簡便而有意義的陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。





預(yù)雜交1)每個(gè)管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。2)用等體積的HYB 取代HYB-。3)60℃水浴,預(yù)雜交4小時(shí)以上。


武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。利用此探針可對(duì)組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及基因水平的分析。





與其他原位雜交技術(shù)相比,熒光原位雜交具有很多優(yōu)點(diǎn),主要體現(xiàn)在:①FISH不需要性同位素標(biāo)記,更經(jīng)濟(jì)安全。②FISH的實(shí)驗(yàn)周期短,探針穩(wěn)定性高,特異性好,定位準(zhǔn)確,能迅速得到結(jié)果。對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進(jìn)行篩選時(shí),可采用該方法。③FISH通過多次化學(xué)反應(yīng),使雜交信號(hào)增強(qiáng),靈敏度提高,其靈敏度與性探針相當(dāng)。④多色FISH通過在同一個(gè)核中顯示不同的顏色可同時(shí)檢測多種序列。⑤既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化。也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結(jié)構(gòu)。 [1]


武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。通常探針操作的長度以100-400nt為宜,過長則雜交率減低。



組織切片與預(yù)處理

冰凍切片:新鮮組織也可在取材后,直接置入液氮中迅速驟冷,冷凍切片后,4%多聚甲醛固定5~10min,也可保存在-70℃中待用。雜交前切片迅速恢復(fù)至室溫并干燥,0.1mol PBS洗三次,2×SSC洗10min,滴加預(yù)雜交液室溫孵育1h。