病毒分離純化挑戰(zhàn)與突破

 春節(jié)期間一場(chǎng)突如其來(lái)的新型冠狀病毒肺l炎疫情導(dǎo)致超近8萬(wàn)人感l染，超過(guò)2700人失去生命，1000多萬(wàn)人口的武漢實(shí)施了史l上前l所未有的封城。這個(gè)讓中國(guó)的經(jīng)濟(jì)活動(dòng)幾乎處于停頓狀態(tài)，讓全世界感到恐慌的肺l炎疫情卻是由小小的病毒引起的，它們是如此之小，以至于您無(wú)法在光學(xué)顯微鏡看清楚它們。這次疫情即讓我們體會(huì)到自然界的威力也讓我們體會(huì)到自然界無(wú)窮的奧妙。即使是科學(xué)技術(shù)高度發(fā)達(dá)的今天對(duì)這種病毒的了解也是非常有限，對(duì)病毒引起的很多疾病我們也沒(méi)有很多好的應(yīng)對(duì)方法。人類不僅僅只是這次遭受病毒引起的肺l炎疫情磨難，其

實(shí)各種流l感、艾l滋病、麻l疹、風(fēng)l疹、天花、水l痘、病l毒性肝l炎、流行性乙型腦炎等各種疾病都是病毒引起的。

病毒相對(duì)于宏觀世界物質(zhì)甚至與細(xì)菌相比都是極其微小的生物體，但與傳統(tǒng)蛋白及核酸生物分子相比，其尺寸又大很多，結(jié)構(gòu)也復(fù)雜得多。病毒結(jié)構(gòu)通常由蛋白質(zhì)組成外衣殼，由核酸組成內(nèi)芯，因此比蛋白和核酸分子都要復(fù)雜很多。病毒尺寸一般在20-100納米之間，而細(xì)菌尺寸一般在1000納米以上，蛋白分子尺寸往往在10納米以下。人們只能借助電子顯微鏡才能看到病毒的結(jié)構(gòu)和形貌。雖然多肽，蛋白，核酸等生物大分子都有成熟的分離純化方法，但病毒到目前也沒(méi)有一個(gè)比較理想的分離方法。

以純化溶瘤病毒為例，由于其在生產(chǎn)過(guò)程中存在宿主蛋白等雜質(zhì)，純化前 SEC測(cè)試純度為6.5%。純化采用兩種基質(zhì)相同的介質(zhì)，其表面化學(xué)功能也很一致，主要區(qū)別是前者是無(wú)孔實(shí)心的層析介質(zhì)，而后者是傳統(tǒng)的多孔層析介質(zhì)。層析純化的方法是陰離子交換吸附然后梯度洗脫（Bind-elute）模式。從層析圖譜可以看出，在洗脫及CIP過(guò)程中無(wú)孔介質(zhì)洗脫雜質(zhì)更小，峰值更低，意味著上樣過(guò)程中結(jié)合的雜質(zhì)會(huì)更少，有利于表面結(jié)合的病毒分子純化。通過(guò)對(duì)層析洗脫液SEC純度分析比較，發(fā)現(xiàn)用傳統(tǒng)的多孔層析介質(zhì)實(shí)驗(yàn)得到的病毒樣品純度為54%（圖 ），而用無(wú)孔的同類型介質(zhì)實(shí)驗(yàn)得到的病毒純度達(dá)到接近90%（圖 ）。