加酶標(biāo)：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“ ”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。



使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。9． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。10． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。11． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。12． 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。



哺乳動(dòng)物細(xì)胞溶質(zhì)中的SOD呈綠色，并且由兩種亞單位構(gòu)成，一種含有銅，另一種含有鋅（Cu/Zn-SOD）。線粒體和細(xì)菌SOD為紅紫色并含有錳（Mn-SOD）。E.coli含有Mn-SOD和Fe-SOD。為了測(cè)定SOD的活性，研究人員嘗試了許多間接的或者直接的方法，其中，NBT的間接法為常用，因?yàn)樗芊奖?。但是，NBT法有幾個(gè)缺點(diǎn)，例如生成的染料水溶性差，而且會(huì)和氧化酶的還原型發(fā)生反應(yīng)。雖然cytochrome C法也常被用來做SOD檢測(cè)，但它和超氧化物反應(yīng)過于劇烈，不能測(cè)定低水平的SOD。