選擇素elisa試劑盒的實驗原理

選擇素elisa試劑盒是一類異親型結(jié)合、Ca2 依賴的細(xì)胞粘著分子，能與特異糖基識別并結(jié)合。主要參與白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的識別與粘著。

實驗原理：

將目標(biāo)包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的結(jié)合，然后加入微生物化的目標(biāo)，將未結(jié)合的生物素洗凈后，加入HRP標(biāo)記和親和素，再次洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶1標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

精密度：精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV表示。CV（%）=SD/mean×100

批內(nèi)差：取同批次選擇素elisa試劑盒對低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測，每份樣本連續(xù)測定20次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。

批間差：選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復(fù)測定8次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。

批內(nèi)差： CV<10% Inter-批間差： CV<13%

經(jīng)測定，試劑盒在X期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性率小于5%。為減小外部因素對試劑盒前后檢測值的影響，實驗室的條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進(jìn)行操作可人為誤差。

選擇素elisa試劑盒識別的配體都是一些寡糖基團(tuán)，迄今為止發(fā)現(xiàn)的配體都是一些具有唾液酸化路易斯寡糖(s-Le，siaglyl-Lewis)或類似結(jié)構(gòu)的分子。一種寡糖基團(tuán)可以存在多種糖蛋白和糖脂分子上，并分布于多種細(xì)胞表面，因此選擇素分子配體在體內(nèi)分布較為廣泛。

RNA病毒檢測試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 凍干粉為逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶的預(yù)混液，將RNA逆轉(zhuǎn)錄與qPCR擴(kuò)增兩個過程合并，一步完成，減少移液次數(shù)、避免交叉污染、操作簡單，節(jié)約時間。

2. Taq酶具有70°C熱啟動功能，顯著提高試劑盒的特異性和敏感度。

3. 主要組分為凍干粉，4℃保存，儲存運(yùn)輸方便，性能穩(wěn)定。

武漢友名生物(U-MeBiotech)技術(shù)有限公司成立于2009年5月18日。公司致力于為廣大科研工作者提供品質(zhì)的生命科學(xué)產(chǎn)品和、有效的技術(shù)服務(wù)。公司對所有崗位員工都經(jīng)過了嚴(yán)格的培訓(xùn)，對所銷售的產(chǎn)品及其使用都比較熟悉。同時，在公司內(nèi)部定期開展自我提高學(xué)習(xí)培訓(xùn)，由各崗位員工對所銷售的產(chǎn)品進(jìn)行系統(tǒng)培訓(xùn)學(xué)習(xí)，并進(jìn)行嚴(yán)格的考核。這都為公司的化服務(wù)提供了有力保障！公司目前主要從事分子生物學(xué)，蛋白質(zhì)研究、細(xì)胞學(xué)研究，NGS等相關(guān)產(chǎn)品的銷售及技術(shù)服務(wù)，同時也開展生物化學(xué)原料的合成，實驗技術(shù)服務(wù)。

轉(zhuǎn)移RNA

轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）在蛋白質(zhì)合成過程中負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸、解讀mRNA遺傳密碼。tRNA占細(xì)胞總RNA的10%~15%，絕大多數(shù)位于細(xì)胞質(zhì)中。tRNA由Crick于1955年提出其存在，Zamecnik和 Hoagland于1957年鑒定。

tRNA一級結(jié)構(gòu)具有以下特點(diǎn)：

①是一類單鏈小分子RNA，長73~95nt（共有序列76nt），沉降系數(shù)4S。

②是含稀有堿基zui多的RNA，含7-15個稀有堿基（占全部堿基的15%~20%），位于非配對區(qū)。

③5′末端堿基往往是鳥piao呤。

④3'端是CCA序列，其中的腺苷酸常稱為A76，其3’—OH是氨基酸結(jié)合位點(diǎn)。

植物ＤＮＡ的ＣＴＡＢ提取法：

1 稱取新鮮葉片2-3ｇ,剪碎放入研缽中,在液氮中研磨成粉末。

2 將粉末轉(zhuǎn)移到的加有7ｍｌ經(jīng)預(yù)熱的1 5×ＣＴＡＢ提取緩沖液15ｍｌ離心管中,迅速混勻后置于65℃水浴中,溫育30ｍｉｎ。

3 取出離心管,冷卻至室溫,加入氯1仿/異戊1醇(24:1),充分混勻,室溫下2300×ｇ離心20ｍｉｎ。

4 將上清轉(zhuǎn)移至另一新的15ｍｌ離心管中,加入1/10體積10%的ＣＴＡＢ和等體積的氯1仿/異戊1醇。充分混勻,2300×ｇ離心20ｍｉｎ。

5 轉(zhuǎn)移上清至另一新的15ｍｌ離心管中,加入等體積1%的ＣＴＡＢ沉淀緩沖液,輕輕搖晃至形成ＤＮＡ絮狀沉淀。1000×ｇ離心10ｍｉｎ,使ＤＮＡ沉淀于管底。

6 加入1 5-2ｍｌ的1ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ及5μｌＲＮａｓｅ置于56℃水浴中過夜。待ＤＮＡ完全溶解后,加2-3ｍｌ4℃預(yù)冷的95%的冰乙醇使ＤＮＡ沉淀,挑出ＤＮＡ,置于1 5ｍｌ離心管中,用70%乙醇清洗30ｍｉｎ,用離心機(jī)甩5ｓ,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5ｍｉｎ,倒出95%乙醇,在超凈工作臺上吹干。

7 將風(fēng)干的ＤＮＡ直接在4℃保存?zhèn)溆没蛉苡?00μｌＴＥ溶液中于-20℃保存。