原位雜交試驗

收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養(yǎng)，到達所需要的發(fā)育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗，然后換成甲9醇，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧6水處理，去除色素?；蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng)，可阻斷色素的形成)

熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是一種分子細胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀80年代末期發(fā)展起來的一種非放6射性原位雜交技術(shù)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感5染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫5瘤遺傳學(xué)和基因組進化研究等許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用熒光標記的單鏈核酸為探針，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸?？捎脽晒鈽擞浀奶结樦苯优c染色體進行雜交從而對基因進行染色體定位。

多種探針標記檢測系統(tǒng)

基于地高3辛、生物素和熒光標記分子的標記和檢測系統(tǒng)是常見的原位雜交檢測方法。

熒光標記檢測常為直接探針標記方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進行核酸標記。由于標記在核酸上的熒光分子必須經(jīng)受雜交和洗脫過程中的考驗，以及熒光分子易于衰減，其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現(xiàn)的背景較低。

原位雜交組織（或細胞）化學(xué)技術(shù)簡稱原位雜交（In situ hybridization, ISH）是應(yīng)用已知堿基順序并帶有標記物的核酸探針與組織細胞內(nèi)待測的核酸，按堿基互補配對原則進行特異性結(jié)合，形成雜交體，然后用與標記物相應(yīng)的檢測系統(tǒng)，通過組織化學(xué)或免3疫組織化學(xué)方法在核酸原有位置進行細胞內(nèi)定位、定性和定量研究。為分子水平研究細胞內(nèi)基因表達及有關(guān)細胞5因子的調(diào)控提供了有效的工具。可視為組織化學(xué)與免3疫組織化學(xué)的重大突破。

原位雜交不需要從組織中提取核酸，對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性，并可完整地保護組織和細胞的形態(tài)，更能準確地反映出組織細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。