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南京聚合酶鏈式反應PCR呼吸系統(tǒng)模型

發(fā)布時間:2020-11-30 03:14  

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甲l基化特異性的PCR

Herman 等( 1996 )在使用重亞硫酸鹽處理的基礎上新建的一種方法。該方法敏感性高,主要用于作定性研究。用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生jia基化的胞嘧定被轉化為尿嘧ding,而jia基化的胞嘧定不變;隨后設計針對jia基化和非jia基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物,如果用針對處理后jia基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,則說明該位點存在jia基化;反之,說明被檢測的位點不存在jia基化。

特點:適用范圍廣,能夠檢測特異位點是否發(fā)生jia基化。

亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

亞硫酸氫鹽修飾后測序法( BSP ) Frommer 等( 1992 )提出的研究 DNA jia基化方法,此方法可靠性及jing確度高,能明確目的片段中每一個 CpG 位點的jia基化狀態(tài)。用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生jia基化的胞嘧ding被轉化為尿嘧ding,而jia基化的胞嘧ding不變。隨后設計BSP引物進行PCR,在擴增過程中尿嘧定全部轉化為胸腺嘧定,zui后對PCR產(chǎn)物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生jia基化,稱為BSP-直接測序法。將PCR產(chǎn)物克long至載體后進行測序,可以提高測序成功率,這種方法稱為BSP-ke隆測序法。

特點:jing確度高,能夠準確檢測出jia基化的程度百分比。







線粒體測序

線粒體是真核生物的重要細胞器,是生物體的能量工廠,參與能量代謝、信號轉導、細胞凋亡等許多生命活動,對生物的生理活動起著至關重要的作用。大部分線粒體基因由于其母系遺傳特性以及進化速率較快等特點,被廣泛地用于種群遺傳學、進化生物學、譜系地理學和系統(tǒng)發(fā)育學、疾病診斷等學科領域。線粒體全基因組在生物進化的研究中具有獨特的優(yōu)勢。由于線粒體有著與真核生物長期共生的進化歷史,因此其基因組包含了反映物種進化的關鍵信息,同時,相對于核基因組,線粒體基因組小,容易對大量物種進行橫向的比較分析,有利于生物進化的研究,因而受到進化生物學家的鐘愛。線粒體的組成可以從兩個層面上反映物種及群體的遺傳和進化,即核酸序列組成和基因組的結構特征,兩者的特征具有不同的進化機制和進化速度,在進化生物學研究中可以很好的互補。





蛋白質質譜鑒定服務

蛋白質(protein)是有機大分子,是構成細胞的基本有機物和生命活動的主要承擔者。蛋白質在催化生命體內各種反應進行、新陳代謝、抵御外來物質入l侵及控制遺傳信息等方面都起著重要的作用。蛋白質的一級結構是氨基酸序列,通過鑒定氨基酸序列來匹配它的蛋白質,這是定性研究,是蛋白質組學的基礎,也是蛋白質組學的重要技術之一。

質譜一般由離子源、質量分析器(Mass analyzer)和離子檢測器(Detector)三部分組成。傳統(tǒng)的質譜僅用于小分子揮發(fā)物質的分析,但隨著新的離子化技術的出現(xiàn),如基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF)和電噴霧電離質譜(ESI-MS)等,質譜技術的出現(xiàn)為蛋白質分析提供了一種新的途徑?,F(xiàn)在蛋白質組學基本研究手段是:以生物質譜技術為核心,對蛋白質進行大規(guī)模、高通量分離、鑒定和分析。

蛋白質質譜鑒定的基本原理是用蛋白酶將蛋白質消化成肽段混合物,經(jīng)MAILDI或ESI等軟電離手段將其離子化,然后通過質量分析器將具有特定質核比的肽段離子分離開來。通過實際譜圖和理論上蛋白質經(jīng)過蛋白酶消化后產(chǎn)生的一級質譜峰圖和二級質譜峰圖進行的比對,進行蛋白鑒定。