如何用制備色譜柱制備低含量的雜質(zhì)？

制備色譜柱為ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質(zhì)，初步提純后用高分辨的LC-MS進(jìn)行定性分析。如何設(shè)定色譜條件，如，流量、進(jìn)樣量、樣品的濃度、切割點的設(shè)置、是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。

（主峰后有二個雜質(zhì)靠得很近。）

答：

1.制備用的流動相盡量等級高一點，否則流動相中的雜質(zhì)會影響LC-MS分析。

2.使用餾分收集器時，延遲體積一定要計算準(zhǔn)確，檢測器的響應(yīng)時間設(shè)到很小，否則都會影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2,大約為4mL/min。進(jìn)樣量設(shè)到幾個mg應(yīng)該基本沒有過載。進(jìn)樣樣品濃度越高越好。假如進(jìn)樣10mg，理論計算0.05%的雜質(zhì)大約只有5μg，顯然濃度太低，盡量是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。

工業(yè)制備色譜

分離純化技術(shù)是制藥過程的核心環(huán)節(jié)之一。分離純化技術(shù)的優(yōu)劣直接關(guān)系到的品質(zhì)和安全性，而且影響到制藥企業(yè)的效益和市場競爭力，尋求經(jīng)濟(jì)、高效綠色的新型分離純化技術(shù)一直受到廣泛的重視。工業(yè)制備色譜技術(shù)具有高效、高選擇性、能耗和溶劑消耗低、廢棄物排放少以及自動化程度高等優(yōu)點，在分離純化中的應(yīng)用和需求日益廣泛，是我國產(chǎn)業(yè)升級的重要發(fā)展方向工業(yè)制備色譜分離材料和分離方法開發(fā)是工業(yè)制備色譜技術(shù)實現(xiàn)在各方面應(yīng)用的基礎(chǔ)。

以重組DNA技術(shù)為標(biāo)志的現(xiàn)代生物技術(shù)是當(dāng)代高科技的核心之一,其發(fā)展將改變醫(yī)學(xué)農(nóng)業(yè)、食品、能源、化學(xué)、環(huán)境等科學(xué)領(lǐng)域的傳統(tǒng)面貌，促進(jìn)人類社會生產(chǎn)力和科學(xué)技術(shù)的巨大進(jìn)步，通常，生物技術(shù)產(chǎn)品的分離、純化、直至得到符合需求的產(chǎn)品需要通過許多步驟才能實現(xiàn)。其中，吸附和液相色譜常常是其主要的、有時甚至是關(guān)鍵的分離技術(shù)之一。

現(xiàn)代生物技術(shù)的迅速發(fā)展及其產(chǎn)業(yè)化對其下游過程，即生物技術(shù)產(chǎn)品(尤其是各種蛋白質(zhì))的分離純化技術(shù)提出了迫切的需求。通過發(fā)酵和動、植物細(xì)胞培養(yǎng)等生成的目標(biāo)產(chǎn)物需通過一系列的分離和純化等步驟才能獲得終的產(chǎn)品。通常，生物技術(shù)產(chǎn)品生產(chǎn)中分離提純成本要占其生產(chǎn)總成本的40%~90%。在以小分子產(chǎn)品為主的傳統(tǒng)發(fā)酵工業(yè)中分離成本要占總成本的60%左右，而以蛋白質(zhì)為代表的現(xiàn)代基因工程產(chǎn)品則有時可高達(dá)90%左右。作為生物工程的一個組成部分，分離技術(shù)在其產(chǎn)品實現(xiàn)中起到重要作用。