動(dòng)物組織細(xì)胞基因組DNA提取

操作步驟

1. 取新鮮或冰凍動(dòng)物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K

（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺式離心機(jī)以12000 rpm離心5min，取上清液入另

一離心管中。

2.加2倍體積異，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進(jìn)行PCR反應(yīng)等，需要進(jìn)一步純化的按下列步驟進(jìn)行）

3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?

10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。

二、大腸菌群檢驗(yàn)方法:

由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，即:需氧及兼性厭氧、在37°C能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進(jìn)行。 目前國內(nèi)采用的進(jìn)出口食品大腸菌群檢測方法主要有國家標(biāo)準(zhǔn)和原國家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法在檢測程序上略有不同。由于腺病毒的這些特點(diǎn)使其廣泛地應(yīng)用于體外基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、體內(nèi)接種yi苗、和基因zhi療等各個(gè)領(lǐng)域。

(一)國家標(biāo)準(zhǔn):國家標(biāo)準(zhǔn)采用三步法，即:乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、分離培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)。乳糖發(fā)酵試驗(yàn):樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36士1C培養(yǎng)48土2h，觀察是否產(chǎn)氣。分離培養(yǎng):將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，36士1°C培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。證實(shí)試驗(yàn):挑取平板上的菌落，進(jìn)行革蘭氏染色觀察。2、細(xì)胞轉(zhuǎn)染:取兩個(gè)EP管，一個(gè)加入Opti-MEM、核心質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管36士1°C培養(yǎng)24土2h,觀察產(chǎn)氣情況。

報(bào)告:

根據(jù)證實(shí)為大腸陽性的管數(shù)，查MPN表，報(bào)告每100ml ( g)大腸菌群的MPN值。具體操作參見GB4789. 3-94 《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群測定》

(二)原國家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，等效采用美國FDA的標(biāo)準(zhǔn)方法，用于對出口食品中的大腸進(jìn)行檢測。本方法采用兩步法：推測試驗(yàn):樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯。36士1C培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。證實(shí)試驗(yàn):將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中，36士1°C培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽性。他們的結(jié)果表明，NimbleGen平臺作為一個(gè)使用高密度重疊探針的平臺，盡管覆蓋了較少的基因組區(qū)域，但在靈敏檢測小的變異時(shí)所需的測序量也少。查MPN表，報(bào)告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。具體操作參見SN0169-92《中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸檢驗(yàn)方法》

分子生物學(xué)檢測

分子生物學(xué)作為現(xiàn)代生物技術(shù)中zui為先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)手段之一，已經(jīng)廣泛滲透到生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，在基礎(chǔ)研究、醫(yī)l療診斷等領(lǐng)域均起到了非常重要的作用。

     借助專業(yè)的技術(shù)優(yōu)勢，英瀚斯生物特配備了高l效的儀器設(shè)備，如SLAN 48P 熒光定量PCR檢測系統(tǒng)、PCR儀、電泳儀、冷凍離心機(jī)、高速離心機(jī)等。目前公司可為您提供反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR、凝膠電泳遷移率等檢測服務(wù)，大大縮短您的實(shí)驗(yàn)周期、降低您的實(shí)驗(yàn)成本。蛋白質(zhì)定量組學(xué)服務(wù)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動(dòng)態(tài)變化對不同生命過程有重要影響。

RNA pull down 檢測

RNA   pull down：RNA沉淀檢測，是檢測RNA結(jié)合蛋白與其靶RNA之間相互作用的主要實(shí)驗(yàn)方法之一。使用體外轉(zhuǎn)錄將RNA進(jìn)行生物素標(biāo)記，并與細(xì)胞蛋白裂解液孵育，形成RNA-蛋白復(fù)合物。高l效毛細(xì)管電泳法(High-performanceCapillaryElectrophoresis,HPCE)這是一-種利用窄孔熔融石英毛細(xì)管來從復(fù)合物中分離不同化學(xué)組分的技術(shù)。復(fù)合物通過磁珠結(jié)合后分離，復(fù)合物純化洗脫后通過Western blot驗(yàn)證檢測特性的蛋白。若篩選可能結(jié)合的蛋白通過質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測篩選。