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HPLC定性分析的主要方法與技術(shù)。

使用保留值定性方法

在所有定性分析方法中， HPLC使用保留值定性分析的方法是基本的方法，他就是合理地運用色譜的一些基本知識對有機化合物所作的反應，從而得出有機化合物應具有的性質(zhì)。HPLC中，兩種相同的物質(zhì)在同一色譜中應具有相同的保留值，因此， HPLC中的定性分析就能充分地應用到這一原理，用相同的色譜對未知物質(zhì)進行簡單的成分和性質(zhì)判斷，同時在同一物質(zhì)組分下色譜上形成的未知峰保留值也是一樣的，這樣就可以初步判定未知有機化合物。HPLC的流動相在此基礎(chǔ)上，適當改變流動相來判斷未知有機化合物的基本性質(zhì)，而在連續(xù)變化的過程中，當發(fā)現(xiàn)兩個保留值峰值相同時，我們可以簡單地判斷為未知有機化合物的性質(zhì)相同。盡管 HPLC的保留值定性分析方法可以區(qū)分同樣的物理性質(zhì)，但不能保證具有相同保留值的兩個有機化合物是同一種物質(zhì)，因此在實際應用中， HPLC利用保留值定性分析的方法雖然簡單，而且很具操作性，但適用范圍較窄，不能適應更多未知有機化合物的性質(zhì)判定。

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采用兩譜聯(lián)用定性方法

HPLC中常采用紫外光、紅外對也要色譜進行全波長掃描。然而，在工業(yè)生產(chǎn)中，常采用紫外檢測儀掃描 HPLC中的有機化合物，通過 HPLC反應定性地得出一些未知有機化合物的有用信息。通過相關(guān)工作人員長期的經(jīng)驗，他們傾向于用液相色譜的大值對紫外線進行掃描，通過全波長掃描尋找兩個液相色譜高峰之間的聯(lián)系，然后通過上一步使用保留值的定性分析方法，對液相色譜中的未知無進行性質(zhì)的判斷。除了這些，工作人員為了使現(xiàn)代的液相色譜定性分析方法更廣泛地應用，一般采用色譜與質(zhì)譜聯(lián)用，這樣的操作可以對未知的有機化合物進行多層次的質(zhì)譜分析，提高液相色譜的定性分析水平，在某個方面也促進了液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)系和應用，為現(xiàn)代液相色譜分析方法提供了非常有效的兩用色譜定性分析方法。隨著科技的不斷進步，串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的應用，使得現(xiàn)代 HPLC以雙譜聯(lián)用定性分析法廣泛應用于中藥領(lǐng)域，在中藥品種、藥品鑒定等方面技術(shù)十分成熟，同時成果也十分顯著。除采用 HPLC和 MS聯(lián)用技術(shù)外，還采用了色譜與 NMR聯(lián)用等技術(shù)，這是一種實用的兩譜聯(lián)用技術(shù)，由于這一技術(shù)對定性要求不高，因此具有很好的通用性，但也因為色譜和 NMR聯(lián)用技術(shù)的要求較低，所以它在實際應用中的使用也較少。

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液相色譜儀在中國被廣泛使用，其全部部件是由哪部分組成，你知道嗎？

一組液相色譜儀大體上分為五個部分：流動相前處理部分、輸液部分、進樣部分、分離部分和檢測部分。

流相前處理部分：

預處理主要包括過濾和除氣兩種，其設備主要有溶i劑過濾器、真空泵和超聲波過濾器。

1、過濾。HPLC所使用的流動相必須預過濾除氣，過濾作用是防止雜質(zhì)顆粒堵塞系統(tǒng)，或影響單向閥的正常工作。過濾器要注意濾膜的選擇，油、水、油膜必須分開使用。水膜易有機溶i劑溶解進入系統(tǒng)，造成泵流和色譜柱堵塞。

2、超聲檢查超聲波的作用是除去流動相中的氣泡。通常超聲檢查的時間是20分鐘左右。超聲波處理后，液溫上升，應冷卻至室溫再使用。隔天再做一次超聲檢查，如果是流動相的話。

遠古羅馬時期，人們就知道將一滴含有混合色素的溶液滴在一塊布或一片紙上，通過觀察溶液展開所形成的同心圓環(huán)，對染料和色素進行分析。事實上，這種簡單的操作已經(jīng)運用了現(xiàn)代色譜的基本原理。

19世紀中期，德國化學家 Runge對古羅馬人的這一做法進行了重大改進，使其具有很好的重復性和定量能力，使得鹽溶液可以在紙上分離；此外，化學家Goppalsr-oeder也將染料和動植物色素分離在長條形紙上，這些研究標志著紙色譜法的建立，并逐漸發(fā)展成現(xiàn)代色譜技術(shù)。

在1903年的華沙自然科學學會生物學會會議上，俄國植物學家 Tswett提出了利用吸附原理分離植物色素的新方法，這是現(xiàn)代色譜學的開端。俄國植物學家 Tswett在1903年召開的華沙自然科學學會生物學會會議上發(fā)表。把碳酸鈣放入直立的玻璃柱中，從頂端注入植物色素的石i油醚浸取液，再用溶劑沖洗，使溶質(zhì)在柱的不同部位形成色帶，首i次向人們公開展示了用色譜法提純的色素溶液以及色譜圖顯示的彩色環(huán)帶柱管。Tswett把這種方法命名為色譜，填充管稱為固定相，沖洗劑稱為流動相。