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發(fā)布時(shí)間:2024-10-24 02:01  






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考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理是什么

     在酸性條件下,考馬斯亮蘭G-250染料與蛋白質(zhì)疏水區(qū)結(jié)合,導(dǎo)致da吸收峰由465 nm 變?yōu)?95 nm,同時(shí)顏色也由棕色變?yōu)樗{(lán)色,該藍(lán)色化合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度的高低成正比關(guān)系。將蛋白質(zhì)樣品或稀釋的BSA 與Bradford試劑混合,測(cè)量在595 nm處的吸收值,在建立由一系列稀釋的BSA建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線的情況下,蛋白質(zhì)的濃度可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線而確定。

    考馬斯亮藍(lán)G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測(cè)定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色,食用藍(lán)色1號(hào)供應(yīng)商,da光吸收在488nm;當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?,食用藍(lán)色1號(hào)生產(chǎn)廠家,蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有da光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,因此可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合在2min左右的時(shí)間內(nèi)達(dá)到平衡,完成反應(yīng)十分迅速;其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。

    該法是1976年Bradford建立,試劑配制簡單,池州食用藍(lán)色1號(hào),操作簡便快捷,反應(yīng)非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測(cè)定微克級(jí)蛋白質(zhì)含量,測(cè)定蛋白質(zhì)濃度范圍為0~1 000μg/mL,xaio可測(cè)2.5μg/mL蛋白質(zhì),是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測(cè)定方法。

考馬斯亮藍(lán)有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍(lán)G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速,常用來作為蛋白質(zhì)含量的測(cè)定??捡R斯亮藍(lán)R250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對(duì)電泳條帶染色。


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?本考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒(Commassie?Blue?Staining?Kit)采用了經(jīng)典的考馬斯亮藍(lán)染色和脫色方法,以考馬斯亮藍(lán)R250為染料,可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色,或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè)。?

 ???使用本試劑盒,采用常規(guī)染色脫色方法累計(jì)時(shí)間達(dá)到2-3小時(shí)后可以觀察到蛋白條帶;采用快速染色脫色方法20分鐘左右即可觀察到蛋白條帶。觀察到清晰的蛋白條帶則需染色脫色更長時(shí)間。?

 ???本試劑盒中的染色液和脫色液經(jīng)過改良,不含有毒的jia醇,但含有刺激性氣味的yi酸。


英文別名 Bis[4-(N-ethyl-N-3-sulfophenylmethyl)aminophenyl]-2-sulfophenylmethylium disodium salt; C.I. Food Blue 2; Acid Blue 9; Alphazurine FG; C.I. 42090中文別名 [[[4-[N-N-(3′-磺基苯)-氨基、、-(2′-磺基)-亞]-2,5-亞環(huán)己二烯基]-(3′-磺基苯)-胺二鈉鹽、C.I.食品藍(lán)2(42090)、食用亮藍(lán)、雙[4-(N--N-3-磺酸苯)氨基]-2-磺酸基二鈉鹽、食用色素亮藍(lán);罌紅二鈉鹽;亮藍(lán)1、酸性藍(lán) 9 [CI 42090]、藍(lán) 1 [CI 42090];食品藍(lán)1/羊毛罌紅A;食用青色1號(hào)(日本名)、食用色素藍(lán)1號(hào);-間磺基芐基-{4"-[4""-(間磺基芐基-)-鄰磺基亞]-2",5-亞}-氫氧化銨內(nèi)鹽之二鈉鹽、食用色素藍(lán)1號(hào)、-間磺基芐基-{4"-[4""-(間磺基芐基--鄰磺基亞}-2"5-亞}-氫氧化銨內(nèi)鹽之二鈉鹽;食品藍(lán)1/羊毛罌紅A /亮藍(lán)。CAS NO.3844-45-9EINECS 223-339-8




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