高效液相色譜的基本原理

色譜法的分離原理是：溶于流動相(mobilephase)中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相(stationphase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。高效液相色譜法以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ)，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有顆粒極細的高效固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。

高效液相色譜法概述

高效液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點而被廣泛應(yīng)用于生物化學及臨床分析。

在現(xiàn)代高效液相色譜分析中，色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞，選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時間，并且使方法更具穩(wěn)定性。

高效液相色譜基本原理

液相色譜根據(jù)分離機理的不同可分為：

?液固吸附色譜

?液液分配色譜

?離子交換色譜

?離子對色譜法

?分子排阻色譜(或凝膠滲透色譜)

（一）液-固吸附色譜

流動相為液體，固定相為固體吸附劑，根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來分離物質(zhì)。

（二）液-液分配色譜

流動相和固定相都是液體的色譜法即為液-液色譜，是利用樣品組分在兩種不相溶的液相間的分配來進行分離。一種液相為流動相，另一種是涂于載體上的固定相。

流動相極性小于固定相極性的液-液色譜法稱為正相分配色譜法。

流動相極性大于固定相極性的液-液色譜法稱為反相分配色譜法。

（三）離子交換色譜

（四）離子對色譜法

（五）分子排阻色譜法