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在實(shí)際工作中，人們經(jīng)常希望 SPE柱可以多次使用以降低成本。美國(guó)瓦瑞安公司生產(chǎn)的 BOND ELUT CERTIFY SPE柱(J. Chromatogr.137:619;1993)的重復(fù)使用情況：當(dāng)樣本基液為血漿時(shí)，該 SPE柱經(jīng)再生后可重復(fù)使用2-3次(回收率可維持80%以上)。據(jù)報(bào)告，還可重復(fù)使用10次 SPE柱(J. Chromatogr.307:371;1986)。這種新型薄膜 SPE柱的再生相對(duì)比較容易，而且可以多次重復(fù)使用。

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有些人曾嘗試過(guò)15次以上重復(fù)使用這種類型的柱子。固相萃取柱的再利用主要依賴于樣品基液的復(fù)雜性。越復(fù)雜的基液，越不可能重復(fù)使用 SPE柱。要小心地重復(fù)使用 SPE柱。，使用過(guò)的 SPE柱子必須再生。更好的方法是用完后立即再生。二是要對(duì)再生后的 SPE柱進(jìn)行評(píng)價(jià)，確保其本底可接受，回收率可接受。

固相萃取小柱 SPE工藝的基本步驟：

萃取柱的活性處理：選擇一種溶劑通過(guò) SPE小柱潤(rùn)濕和活化 SPE填料，使分析物能夠與固相表面緊密接觸，易于發(fā)生吸附作用，并可去除柱中可能存在的雜質(zhì)，減少污染；隨后還要選擇一種易更換的溶劑，該溶劑具有急性毒性，湘潭固相萃取柱， PH值與樣品基體相似，可使樣品溶液與吸附劑表面良好接觸，提高粗去效率。

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一般來(lái)說(shuō)，我們需要分離的混合物的性質(zhì)各不相同，很難通過(guò)調(diào)整 PH來(lái)達(dá)到要求。一般而言，固相萃取柱選擇，在改變流動(dòng)相 PH的基礎(chǔ)上，又加入緩沖鹽以改變組分的選擇性和分離程度。大多數(shù)C18反相分離柱在使用

一、強(qiáng)酸淋洗、強(qiáng)堿

用硅膠作載體的粘結(jié)相填料，其使用要求是：流動(dòng)相 PH值在2.5-7.5之間。在 PH<2時(shí)，流動(dòng)相可能與載體硅膠和合相發(fā)生水解反應(yīng)，從而導(dǎo)致碳鏈損失；在 PH<7時(shí)，流動(dòng)相可能使載體硅膠溶解。因此，硅膠基體C18 (即 ODS)在強(qiáng)堿條件下基本壽命較短，聚合體C18雖然能在高堿性條件下穩(wěn)定工作，但其價(jià)格昂貴，分離性能及模組強(qiáng)度均不如 ODS。

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改進(jìn)凈化方式

在一般情況下，目標(biāo)化合物模式比雜質(zhì)模式的凈化效果要好，固相萃取柱類型，如果要分析的是某種特定種類的化合物，則較好是用保留目標(biāo)化合物的模式來(lái)分析；舉一個(gè)簡(jiǎn)單的例子，也就是對(duì)蔬菜中的多菌靈和塞菌靈(一類堿性農(nóng)1藥)進(jìn)行分析，用陽(yáng)離子交換柱可專一性地保留這些農(nóng)1藥，使其與干擾物基本完全分離，而用正相吸附劑或石墨化炭黑進(jìn)行保留干擾物的操作只能去除主要的干擾物，保留干擾物的數(shù)量較多。

此外，如果可以用多個(gè) SPE柱對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行凈化，應(yīng)選擇選擇性好的吸附劑；選擇性越高，離子交換>正相>反相。

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(在使用這些清潔溶劑之前，可與柱子供應(yīng)商協(xié)商，以確保它們不會(huì)對(duì)填料造成損害。硅樹(shù)脂基質(zhì)中的柱狀物一般都可以用，但是某些洗滌溶劑的配方可能導(dǎo)致有機(jī)聚合物基質(zhì)的填充物膨脹或收縮，從而影響其色譜特性。)此外，確保上表所用的清潔溶劑與以前使用的溶劑可互溶，丙i醇可作為良好的過(guò)渡。每一個(gè)溶劑系統(tǒng)至少要沖洗20個(gè)液柱體積。因?yàn)槟承┤軇┫到y(tǒng)粘度較大，應(yīng)相應(yīng)調(diào)整沖洗流速，以確保不超過(guò)泵的壓力。在用完胍或脲等溶劑清洗過(guò)的柱子上，至少要用40~50柱體積的 HPLC級(jí)純水進(jìn)行沖洗。對(duì)反相柱來(lái)說(shuō)，不推薦使用十二烷基磺酸鈉(SDS)和 Trition等表面活性劑，因?yàn)檫@些化合物一定會(huì)牢固地吸附到硅膠結(jié)合相柱上，因此難以去除。使用表面活性劑可以改變填料的表面性能。但是， SeparationGroup的研究表明：多肽合成過(guò)程中產(chǎn)生的保護(hù)基和清除劑對(duì)柱體的污染，可通過(guò)向流動(dòng)相中加入500μ L1% SDS溶液，以1 ml/min的速度清除。以5%~95% EBN/1%(v/v)的三i氟乙i酸梯度洗脫后，在平衡起始條件下，固相萃取柱供應(yīng)商，柱體的多肽分離功能得以恢復(fù)。

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在反相-固相萃取模式中，溶劑體系的極性應(yīng)按樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序遞減，而溶劑體系的洗脫強(qiáng)度應(yīng)逐漸增加。要確保所選的樣本溶劑不會(huì)洗脫目標(biāo)化合物，所選的淋洗劑應(yīng)在不洗脫目標(biāo)化合物的前提下，zui大限度地洗脫干擾物，所選的洗脫劑應(yīng)能恰巧完全洗脫目標(biāo)化合物。在許多固相萃取材料的極性表面和樣品中目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)之間會(huì)產(chǎn)生極性力。通常使用極性力的吸附劑在色譜中被稱為正相色譜吸附劑。極性力比非極性力更強(qiáng)，但比離子力更弱。常用的極性基團(tuán)有羥基，胺基，巰基等。

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