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發(fā)布時間:2020-12-31 07:24  
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PCR實驗室條件:
1、必須擁有標(biāo)準(zhǔn)的的PCR熒光實驗室;實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出由于該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到廣泛應(yīng)用。本文試就其定量原理、方法及參照問題作一介紹
2、檢測設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光實驗室設(shè)置要求;熒光定量PCR儀 實時熒光定量試劑 通用電腦 自動分析軟件,構(gòu)成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統(tǒng)。
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PCR實驗室完備的實驗室配套設(shè)施
完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗工作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈工作臺、離心機(jī)、加樣器等。
PCR擴(kuò)增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域:試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染,進(jìn)入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
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污染的預(yù)防與控制
PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。常見的有以下幾種污染類型:擴(kuò)增產(chǎn)物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。要避免污染,首先應(yīng)是預(yù)防,而不是排除。
標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗區(qū)
試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。
PCR實驗室應(yīng)相對獨立,盡量避免與其他普通實驗套疊或者有通道上的交叉。之前看過一個圖,他們的PCR實驗室設(shè)置在檢驗科的里面,醫(yī)廢和標(biāo)本的運送要穿過檢驗科的整個走廊,這種情況人、物流、污物均在同一個通道,感ran風(fēng)險較高,應(yīng)盡量避免。
PCR實驗室應(yīng)設(shè)置以下區(qū)域:試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。這個4個區(qū)域在物理空間上必須完全獨立,各區(qū)域無論是空間上還是在使用中,應(yīng)當(dāng)始終處于完全的分割狀態(tài),不能有空氣的直接相通。根據(jù)使用儀器的功能,區(qū)域可以適當(dāng)合并。每個區(qū)域間設(shè)置傳遞窗,要求一側(cè)打開時另一側(cè)無法打開。
4個區(qū)域應(yīng)設(shè)置獨立的緩沖間,應(yīng)設(shè)置可以通到四個操作區(qū)域的PCR走廊,在進(jìn)入各區(qū)域前,應(yīng)設(shè)置更衣間,每個區(qū)域的衣服可用不同顏色進(jìn)行區(qū)分,在清潔區(qū)應(yīng)設(shè)置洗澡間、衛(wèi)生間、值班室。還應(yīng)考慮到醫(yī)廢和標(biāo)本的運送通道。