全基因組脫氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)的提

菌株的鑒定：對(duì)篩選得到的乳酸菌進(jìn)行16S rDNA序列分析，確定其種屬。將活化好的菌液，進(jìn)行菌株的全基因組脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)的提取[16]，然后對(duì)基因組DNA的16S rDNA區(qū)域進(jìn)行PCR擴(kuò)增，上游引物27F序列5′-AGAGTTTGATCCTGGCCTCA-3′，下游引物1492R序列：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′，擴(kuò)增片段為1 500 bp。PCR體系50 μL：10×buffer 5 μL；脫氧核糖核苷酸三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate, dNTP) 5 μL；上游引物(25 μmol/L)0.5 μL；下游引物(25 μmol/L)0.5 μL；毒性:60億活芽孢/mL解淀粉芽孢桿菌Lx-11懸浮劑急性毒性測(cè)定，對(duì)大鼠急性經(jīng)口LD50＞5,000mg/kg，急性經(jīng)皮LD50＞2,000mg/kg，急性吸入LC50＞2,000mg/L。Taq DNA 聚合酶(250 U)0.5 μL；模板DNA 1.5 μL ；ddH2O 37 μL。PCR擴(kuò)增條件為：95 ℃ 3 min；95 ℃ 10 s；55 ℃ 30 s；72 ℃ 1 min；72 ℃ 5 min，2～4反應(yīng)步驟進(jìn)行30個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其純度及濃度，將達(dá)到測(cè)序要求的擴(kuò)增產(chǎn)物送至上海華大基因進(jìn)行測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果在美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心(national center for biotechnology information, NCBI)上BLAST進(jìn)行比對(duì)，并確定其種屬。

養(yǎng)牛業(yè)中的應(yīng)用在牛生產(chǎn)中

在養(yǎng)牛業(yè)中的應(yīng)用

在牛生產(chǎn)中，有關(guān)Ba的報(bào)道主要集中在分離鑒定方面。王選等從健康青年牛的糞便中分離得到1株能耐受0.5％牛膽酸鹽的解淀粉芽孢桿菌N-4，對(duì)痢疾桿菌的抑菌圈直徑達(dá)17.6 mm；姜軍坡等以大腸桿菌為指示菌，篩選到1株有較強(qiáng)抑菌作用的解淀粉芽孢桿菌BN-9株；周鑫等以羧纖維素鈉作為碳源從羚牛糞樣懸液中分離到2株可分解纖維素的解淀粉芽孢桿菌。針對(duì)其在牛體內(nèi)的作用效果還有待深入研究。在養(yǎng)牛業(yè)中的應(yīng)用在牛生產(chǎn)中，有關(guān)Ba的報(bào)道主要集中在分離鑒定方面。

解淀粉芽孢桿菌對(duì)肉雞中球蛋白的影響

IgA、IgM和IgG作為動(dòng)物機(jī)體重要的幾類球蛋白，對(duì)抑制外源原菌起到重要的作用。IgG占血液中球蛋白總量的75％～80％，在增強(qiáng)細(xì)胞吞噬病原菌和抵抗等方面有重要作用。

研究顯示IgG對(duì)雞的生長(zhǎng)發(fā)育期重要的保護(hù)作用，是一類可通過(guò)母體卵黃傳遞的球蛋白。試驗(yàn)表明，微生態(tài)制劑可增強(qiáng)畜禽體液，但也有試驗(yàn)顯示球蛋白的數(shù)量沒(méi)有發(fā)生變化。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肉雞飼喂解淀粉芽孢桿菌后中IgG和IgM在其生長(zhǎng)后期均有顯著升高，IgA沒(méi)有顯著性變化。也發(fā)現(xiàn)高劑量的解淀粉芽孢桿菌顯著增加了35日齡肉雞中IgG和IgA的濃度，IgM的濃度并沒(méi)有顯著性改變。通過(guò)HP-Chemstationystem工作站采集和處理數(shù)據(jù)，先由譜庫(kù)初步鑒定成分，結(jié)合化學(xué)成分的保留時(shí)間、質(zhì)譜、實(shí)際成分和保留指數(shù)等進(jìn)行定性，采用面積化法進(jìn)行定量。另外，解淀粉芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌親緣性較高，后者在試驗(yàn)中顯示可促進(jìn)動(dòng)物發(fā)育，增加淋巴細(xì)胞數(shù)量，提高體液和細(xì)胞等。但目前日糧中添加解淀粉芽孢桿菌對(duì)肉雞球蛋白影響的研究較少，且、添加量、試驗(yàn)動(dòng)物和飼喂方式等因素均會(huì)產(chǎn)生不同結(jié)果，因此具體機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

解淀粉芽孢桿菌作為新的益生菌添加劑具有廣闊的應(yīng)用前景

目前，國(guó)內(nèi)外研究人員對(duì)關(guān)于從植物及土壤中分離鑒定得到不同解淀粉芽孢桿菌菌株的報(bào)道較多，并且進(jìn)一步分析研究了其代謝產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)對(duì)多種植物病原真菌及細(xì)菌有較好的抑制效果；也有不少學(xué)者從動(dòng)物糞便及腸道中分離得到新的解淀粉芽孢桿菌，并將其作為益生菌添加劑添加到飼糧中用于動(dòng)物生產(chǎn)，有較好抑制致病菌的效果，提高動(dòng)物生產(chǎn)。解淀粉芽孢桿菌作為新的益生菌添加劑具有廣闊的應(yīng)用前景，有必要進(jìn)一步篩選出更適宜在飼糧中添加的新，使其能作為益生菌在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中廣泛應(yīng)用。另外目前關(guān)于其抑菌機(jī)理及促生長(zhǎng)等方面的報(bào)道并不多，因此還需要進(jìn)一步進(jìn)行深入研究，在分子及基因水平闡述作用機(jī)理。沈濤等[30]研究表明：解淀粉芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌以1∶1比例混合飼喂草魚(yú)，可顯著提高草魚(yú)腸道內(nèi)容物胰蛋白酶活性和肝脂肪酶活性，顯著提高腸道芽孢桿菌數(shù)量，顯著降低弧菌和大腸桿菌數(shù)量。