ELISA定量測定

ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)值，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是相對理想的檢測區(qū)域。

測定小分子量物質(zhì)常用競爭法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線注意圖中橫坐標(biāo)為對數(shù)關(guān)系，這更有利于測定系統(tǒng)的表達(dá)。

tRNA二級結(jié)構(gòu)

約50%堿基配對，形成四段雙螺旋，與五段非配對序列形成三葉草形結(jié)構(gòu)。

該結(jié)構(gòu)中存在四臂四環(huán)：

①氨基酸臂。 

②二氫尿C4H4N2臂（DHU臂、D臂）和二氫尿C4H4N2環(huán)（DHU環(huán)、D環(huán)），特征是含二氫尿C4H4N2（DHU、D）。 

③反密碼子臂和反密碼子環(huán)，特征是反密碼子環(huán)含反密碼子。反密碼子5′端與尿苷酸連接，3′端與piao呤核苷酸連接。TΨC臂（T臂）和TΨC環(huán)（Ψ環(huán)），特征是TΨC環(huán)含胸腺C4H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。

④額外環(huán)3~21nt。

tRNA三級結(jié)構(gòu)呈L形，氨基酸結(jié)合位點(diǎn)位于其一端，反密碼子環(huán)位于其另一端，DHU環(huán)和TΨC環(huán)雖然在二級結(jié)構(gòu)中位于兩側(cè)，但在三級結(jié)構(gòu)中卻相鄰。盡管各種tRNA的長度和序列不盡相同，但其三級結(jié)構(gòu)相似，提示三級結(jié)構(gòu)與其功能密切相關(guān)。

DNA提取過程中各種試劑的作用及原理

溶液II-NaOH-SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是穩(wěn)定的。但當(dāng)pH>12或pH<3時，就會引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。 在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1/L，加抽提液時，該系統(tǒng)的pH就高達(dá)12.6， 因而促使染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性。

　　SDS：

　　SDS是離子型表面活性劑。它主要功能有：

　　(1)溶解細(xì)胞膜上的脂質(zhì)與蛋白，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜。

　　(2)解聚細(xì)胞中的核蛋白。

　　(3)SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為R-O-SO3-…R -蛋白質(zhì)的復(fù)合物，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來。 但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取過程中，必須把它去除干凈，防止在下一步操作中 (用RNase去除RNA時)受到干擾。