如從培養(yǎng)的植物細(xì)胞中提取基因組DNA，請(qǐng)離心收集2×103～1×107的培養(yǎng)植物細(xì)胞，加入150 μl水充分懸浮細(xì)胞后移入研缽中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末狀。注）樣品研磨應(yīng)充分，否則將會(huì)嚴(yán)重影響基因組DNA的收率。② 將研缽移至65℃水浴，當(dāng)樣品粉末剛開(kāi)始融化時(shí)，向研缽中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿移至Collection Tube中。如勻漿體積不足650 μl，請(qǐng)補(bǔ)充Solution A至650 μl。65℃保溫15分鐘。注）處理富含纖維的根/莖等植物材料或富含淀粉、蛋白質(zhì)的種子等時(shí)，可延長(zhǎng)水浴時(shí)間至60分鐘。




酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，二氫黃酮醇還原酶（DFR）測(cè)試盒，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。




使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。9． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。10． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。11． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。12． 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。




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