制備液相色譜的作用

由于液相色譜儀的溶質(zhì)分子在流動相、靜態(tài)流動相和固定相中的傳質(zhì)過程而導(dǎo)致的峰展寬。溶質(zhì)分子在流動相和固定相中的擴(kuò)散、分配、轉(zhuǎn)移的過程并不是瞬間達(dá)到平衡，實(shí)際傳質(zhì)速度是有限的，這一時(shí)間上的滯后使色譜柱總是在非平衡狀態(tài)下工作，從而產(chǎn)生峰展寬.液相色譜儀的靈敏度高，分析速度快，操作方便等優(yōu)點(diǎn)，但是受技術(shù)條件的限制，沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析。而液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要?dú)饣虼瞬皇茉嚇訐]發(fā)性的限制。

使用外力使含有樣品的流動相通過一固定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面.當(dāng)流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí)，液相哪個(gè)牌子好，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。 由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同，隨著液相色譜儀中流動相的移動，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時(shí)間不同，從而按一定次序由固定相中先后流出。與適當(dāng)?shù)闹髾z測方法結(jié)合，實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測。

液相色譜儀的構(gòu)造

液相色譜系統(tǒng)主要由流動相儲液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。液相色譜的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)，液相哪家效果好，進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利、切換嚴(yán)密。同時(shí)，由于液體流動相黏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體，為了減低柱壓，液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。

液相色譜儀分類

      液相色譜儀依據(jù)樣品在固定相和流動相分離過程的物理化學(xué)原理，可分為以下五種。

　　1、吸附色譜：

　　用固體吸附劑作固定相，以不同極性溶劑作流動相，依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實(shí)現(xiàn)分離。

　　2、分配色譜：

　　用載帶在固相基體上的固定液作固定相，液相價(jià)格，以不同極性溶質(zhì)作流動相，依據(jù)樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來實(shí)現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和液體流動相相對極性的差別，又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當(dāng)固定相的極性大于流動相的極性時(shí)，可稱為正相分配色譜或簡稱正相色譜;若固定相的極性小于流動相的極性時(shí)，可稱為反相分配色譜或簡稱反相色譜。

3、離子色譜：

　　用微粒離子交換劑作固定相，液相，以具有一定pH值的緩沖溶液作流動相，依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團(tuán)進(jìn)行可逆性離子交換能力的差別而實(shí)現(xiàn)分離。

　　4、體積排阻色譜：

　　用化學(xué)惰性的多孔性凝膠作固定相，按固定相對樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來實(shí)現(xiàn)分離。以水溶液作流動相的體積排阻色譜柱，稱為凝膠過濾色譜;以有作流動相的體積排阻色譜法，稱為凝膠滲透色譜法。

　　5、親和色譜：

　　以在不同基體上，鍵合多種不同特性的配位體作固定相，用具有不同pH值的緩沖溶液作流動相，依據(jù)生物分子與基體上鍵聯(lián)的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別，而實(shí)現(xiàn)對具有生物活性的生物分子的分離。

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