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發(fā)布時(shí)間:2021-10-26 02:01  





蛋白結(jié)晶板
近年來(lái),晶狀體蛋白質(zhì)組學(xué)的相關(guān)研究日漸廣泛.蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)以其高通量,等優(yōu)勢(shì),為晶狀體這一人體內(nèi)蛋白質(zhì)含量高組織的蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供了可靠的技術(shù)支撐,從而為揭示年齡相關(guān)性白的發(fā)生機(jī)制提供了新思路和新方向.本文就蛋白質(zhì)組學(xué)的分離,鑒定及相關(guān)新技術(shù)在晶狀體蛋白研究中的應(yīng)用進(jìn)展做一系統(tǒng)綜述。
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蛋白質(zhì)結(jié)晶原理
蛋白質(zhì)的X射線結(jié)構(gòu)分析首先要獲得合適的單晶。蛋白質(zhì)結(jié)晶學(xué)尚未發(fā)展成熟,盡管很受人親睞,特別是受航天飛機(jī)中微重力實(shí)驗(yàn) 的激發(fā)。蛋白質(zhì)結(jié)晶是一個(gè)反復(fù)試驗(yàn)的過(guò)程,蛋白質(zhì)逐漸會(huì)從溶液中析出,雜質(zhì)、晶核及其他未知因素對(duì)此過(guò)程有所影響。通常,蛋白質(zhì)越純,生長(zhǎng)晶體幾率越大。蛋白質(zhì)結(jié)晶學(xué)者對(duì)蛋白質(zhì)的純度要求要嚴(yán)于生化學(xué)家的要求,后者往往在酶催化活性足夠高時(shí)就很滿意。另一方面,為了使蛋白質(zhì)結(jié)晶,不僅要加其他成分,所有蛋白質(zhì)分子的表面性質(zhì)也必須是相同的,特別是表面的電荷分布,因?yàn)樗绊懢w內(nèi)分子的聚集。質(zhì)譜是蛋白質(zhì)結(jié)晶中的一種有效工具,例如檢測(cè)重組蛋白的表達(dá)、樣品純度、重原子衍生物及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的特性。

新技術(shù)提升蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率
超構(gòu)材料21世紀(jì)初被提出,截至目前它仍然是非?;钴S的前沿領(lǐng)域。其中的微結(jié)構(gòu),24孔初篩板哪家好,大小尺度與它作用的蛋白質(zhì)尺寸相當(dāng),因此得以對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)晶過(guò)程施加干預(yù),對(duì)蛋白質(zhì)的聚集態(tài)形成起到促進(jìn)作用,從而降低了兩步成核中的步能壘。其次,通過(guò)材料本體結(jié)構(gòu)的晶格對(duì)聚集態(tài)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行引導(dǎo)排列,促進(jìn)蛋白質(zhì)分子的有序排列和晶核形成,從而降低了兩步成核中的第二步能壘。
盡管通過(guò)實(shí)驗(yàn)和理論證明了超構(gòu)材料在蛋白質(zhì)結(jié)晶方面的巨大潛力,但要充分發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)則必須兼容當(dāng)前蛋白質(zhì)結(jié)晶通過(guò)的高通量篩選系統(tǒng)。目前國(guó)際上普遍采用液體處理機(jī)器人來(lái)進(jìn)行高通量結(jié)晶篩選,篩選一個(gè)結(jié)晶條件的蛋白樣品消耗體積為納升級(jí)別。因此,如何快速,穩(wěn)定地將成核劑添加到高通量系統(tǒng)的同時(shí),又不對(duì)結(jié)晶系統(tǒng)造成大的影響成為急需解決的問(wèn)題。
隨后通過(guò)優(yōu)化生產(chǎn)和制備工藝,考察了各生產(chǎn)因素對(duì)成核劑尺寸和穩(wěn)定性的影響,確定了適合高通量蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選的成核劑混懸劑的制備工藝流程。這是一種含有具有表面超結(jié)構(gòu)的有機(jī)無(wú)機(jī)復(fù)合材料,其尺寸分布在幾百納米到幾微米之間。該產(chǎn)品的組成為材料顆粒與水溶液的混懸液。在蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選實(shí)驗(yàn)中,使用該產(chǎn)品有助于提高蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選的成功率,包括改善晶體的分辨率和篩選新的結(jié)晶條件,使不結(jié)晶或難結(jié)晶的蛋白質(zhì)成功結(jié)晶,展現(xiàn)了巨大的應(yīng)用潛力,使用該成核劑已經(jīng)成功結(jié)晶和解析十多個(gè)蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)。
此外,針對(duì)能夠結(jié)晶的蛋白質(zhì)分子,成核劑混懸液在篩選新的結(jié)晶條件,提升結(jié)晶的分辨率方面同樣有效。目前,先進(jìn)院已經(jīng)與國(guó)內(nèi)超過(guò)18個(gè)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展了合作,助力我國(guó)的生命科學(xué)和生物研究。

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