細(xì)胞復(fù)蘇

將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代

細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25?TA的胰蛋白酶，放人細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù)，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

iPS存在的風(fēng)險(xiǎn)

1. iPS 與ES細(xì)胞基因表達(dá)雖很相似，但iPS細(xì)胞存在遺傳缺陷．

2. iPS細(xì)胞的成瘤性，不同體細(xì)胞來(lái)源的iPS細(xì)胞成瘤性有差異．因此，應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)墓w細(xì)胞或篩選安全型IPS細(xì)胞克服IPS細(xì)胞臨床cure的成瘤性．

3. iPS細(xì)胞及其體外誘導(dǎo)分化細(xì)胞的異質(zhì)性．體細(xì)胞重編程不充分(partiallyreprogrammed IPSCs)、篩選標(biāo)準(zhǔn)不嚴(yán)緊和iPS細(xì)胞攜帶供體．細(xì)胞的表觀遺傳記憶和iPS 細(xì)胞分化不定向都導(dǎo)致細(xì)胞異質(zhì)性，異質(zhì)性是導(dǎo)致iPS細(xì)胞成瘤的潛在因素

4. iPS細(xì)胞體外定向分化細(xì)胞的功能與行為研究尚少，尤其在細(xì)胞cure上，目的細(xì)胞是否會(huì)在cure靶位或遷移到非靶位點(diǎn)成瘤，或異位形成組織等是亟待闡明的問(wèn)題．