如何用制備色譜柱制備低含量的雜質(zhì)？

制備色譜柱為ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質(zhì)，初步提純后用高分辨的LC-MS進行定性分析。如何設(shè)定色譜條件，如，流量、進樣量、樣品的濃度、切割點的設(shè)置、是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。

（主峰后有二個雜質(zhì)靠得很近。）

答：

1.制備用的流動相盡量等級高一點，否則流動相中的雜質(zhì)會影響LC-MS分析。

2.使用餾分收集器時，延遲體積一定要計算準確，檢測器的響應(yīng)時間設(shè)到很小，否則都會影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2,大約為4mL/min。進樣量設(shè)到幾個mg應(yīng)該基本沒有過載。進樣樣品濃度越高越好。假如進樣10mg，理論計算0.05%的雜質(zhì)大約只有5μg，顯然濃度太低，盡量是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。

反相色譜分離后，如何快速從流動相中得到產(chǎn)品？

可以考慮先在低溫下，減壓旋蒸除去其中的有機的溶劑，然后用萃取的方法把產(chǎn)品萃取出來，然后再低溫再旋蒸，這樣，就可以不將溫度升得很高而得到產(chǎn)品。如果要直接蒸掉流動相，水泵的真空度要注意（要檢查氣密性），否則蒸水會很慢。一般比較好的泵在60～70度即可蒸掉水，如果泵的真空度不好，可能需要80～90度才行，這樣容易暴沸導致樣品損失。溫度太高可能引起物質(zhì)變性。

制備色譜之DAC如何次次裝出高柱效

動態(tài)軸向壓縮柱（Dynamic Axial Compression Column，DAC）是工業(yè)化制備液相色譜分離的重要組成部分。當用戶填裝直徑50mm以上制備柱時，傳統(tǒng)預(yù)裝柱很難裝出高柱效和對稱性，另外預(yù)裝柱使用過程柱頭容易塌陷，導致柱效變差，無法滿足長期持續(xù)純化生產(chǎn)。DAC在運行過程中，活塞可以提供持續(xù)壓力，保證很優(yōu)的填裝柱床密度和穩(wěn)定性，從而長時間保持很佳分離效果。相比于預(yù)裝柱或彈簧柱，DAC可以輕松填裝和拆卸，實現(xiàn)不同填料反復填裝和輕松切換。有人說大柱子不用考慮柱效和對稱性，只要能分出樣品就行?，F(xiàn)實是色譜就是靠柱效來分離的，柱效越高，分離越好，載量越大，收率和得率越高。

通常制備色譜方法開發(fā)在4.6mm，10mm或20mm的半制備柱，然后放大到DAC50或DAC100, DAC200，DAC300, DAC450, DAC600或DAC800。理論上多大規(guī)模的色譜柱都可以實現(xiàn)與分析柱或半制備柱同樣的效率，在現(xiàn)實中，設(shè)計優(yōu)良的DAC柱效甚至高于預(yù)裝柱。只有柱效和對稱性類似才能保證了分離方法的線性放大。